主要依靠临床表现及细菌学检查。如果早期临床不能确诊，必要时可做活体组织检查。
放线菌侵入组织后，可引起组织坏死及形成脓肿，其中有放线菌颗粒（actinomy cotis granules）或称为“硫磺颗粒”（sulphur granules），由菌体和菌丝组成，色淡黄，直径可达数百微米。镜下见嗜碱性不规则分叶体，中央部呈均一性，边缘部有辐射状分支细丝，细丝顶端常有胶体鞘膜，形成玻璃样杵状体。周围有大量中性多核白细胞环绕，再外周为上皮样细胞、巨细胞、嗜酸性细胞及浆细胞，最外层为致密的纤维结缔组织。
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